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注意事项

１、革兰选用活跃生长期菌种染色，氏染色的事项老龄的注意革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。

２、革兰涂片不宜过厚，氏染色的事项以免脱色不完全造成假阳性。注意

３、革兰脱色是氏染色的事项革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，注意脱色过度造成假阴性。革兰

实验流程

１、氏染色的事项取载玻片用纱布擦干，注意载玻片的革兰一面用马克笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。涂菌的氏染色的事项部位在火焰上烤一下，除去油脂。注意

２、涂片

液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近５厘米左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径２毫米左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。

固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。

３、晾干：让涂片在空气中自然干燥。

４、固定：让菌膜朝上，通过火焰２－３次固定（以不烫手为宜）。

５、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染１分钟。

６、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形态。

７、媒染：滴加１滴碘液，染１分钟，水洗。

８、脱色：吸去残留水，连续滴加９５％乙醇脱色２０－３０秒至流出液无紫色，立即水洗。

９、复染：滴加蕃红复染３－５分钟，水洗。至此，革兰氏染色结束。

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